1507-08年达芬奇以炭笔、白垩粉笔在有色的厚纸板上创作了一幅《圣母子、圣安娜和施洗者约翰》草图。内容与佛罗伦斯1501年的草图类似，只是此处以年幼的施洗约翰取代了羔羊。这实际上是结合了两个十五世纪佛罗伦斯的流行题材：《圣母子和施洗约翰》以及《圣母子与圣安娜（玛利亚的母亲，也是佛罗伦斯的守护圣人之一）》。因此，画中表现了四个人物之间从外形到内心的紧密互动。

《圣母子、圣安娜和施洗者约翰》

四个人物眼神的交错凝视，形成一个优美的流线和内聚的构图：圣安娜慈祥地望着女儿玛利亚，而玛利望着两个孩子，圣婴对着约翰，而小约翰也忠诚地回望着耶稣。为了形成紧密的整体，达芬奇让人物交叠着，圣母（别纽地）半坐在圣安娜的腿上，使得两人几乎合为一体。

玛利亚手中的圣婴好像知道自己的使命，几乎挣脱母亲的怀抱，努力向前，举着小手赐福给约翰—将来为他铺平传道之路的人。圣安娜的手势（仅有粗略的轮廓）令人想起《最后的晚餐》中的汤玛斯同样手指青天，暗喻了“上帝”的意思。目睹了两个孩子的互动，安娜会心微笑，手指上天仿佛在向玛利亚说：“一切都是神的安排。”这个“微笑”再次传达了不可言喻的奥秘 — 安娜领悟了他人难以参透的天机，就像佛祖拈花，大迦叶心领神会的微笑一般。

而圣母的神情虽然详和温柔，微笑中却带着些许忧郁。她预知了孩子的未来的命运，却只能被动地抱着急欲和约翰履行义务关系的圣婴。达芬奇画过不少圣母子的题材，对于婴孩作过充分的观察和速写。他在笔记本中提到过：“画小孩坐着的时候，应该是活泼而不停扭动的。”所以达芬奇所有的《圣母子》题材中，圣婴都是动态、不安分的。在此圣婴“赐福”的动作更是把儿童的天性溶入在宗教的寓意中。

由于草图上没有打洞的痕迹，表示此初稿尚未进行腾写至画板上的阶段。至于未完成的原因也引起众多猜测。达芬奇在犹豫什么？遇到了构思上的困难吗？被其它研究分心了吗？我们不得而知。

作品曾经收藏在英国伯灵顿学院，因此又名《伯灵顿学院大型草图》。由于经费不足，学院曾经在1962年有意以80万英镑卖出草图。然而，英国政府怕流落外人手中，便将作品在伦敦国家画廊展出，盛况空前，四个月中就有25万人参观。许多人自发捐款，希望将它保留在英国。最后国家艺术收藏基金会帮助之下如愿以偿。1986年，一个狂徒对着这幅草图射击，造成了玛利亚胸口的一些损坏，修复者因而有机会检视了纸板，发现厚纸板是由8层纸合成的。此作是伦敦国家画廊收藏的最脆弱的作品之一，被特别悬挂在特别建造的保护在特别遮光的小房间内；以防白粉笔和炭笔受光太强而褪色。）@*